La commande de cette œuvre doit émaner des deux donateurs agenouillés de part et d’autre du trône de sainte Anne, ces places étant d’ordinaire occupées par les prophètes Isaïe ou Jérémie et par le roi David.

Ce tableau combine de manière originale la représentation de « sainte Anne trinitaire », qui consiste en la réunion de sainte Anne avec sa fille, la Vierge, soutenant elle-même l’Enfant Jésus, et de la parenté de sainte Anne, qui a pour modèle celle de l’arbre de Jessé. Les trois époux et les trois filles d’Anne, toutes trois prénommées Marie, ainsi que leurs conjoints et leurs sept enfants, apparaissent à mi-corps dans les corolles portés par les rinceaux de cet arbre généalogique dominé par Dieu le Père. L’identification des différents membres de cette parenté a été rendue possible par une gravure, dans laquelle les noms des différentes figures sont consignés. Il est difficile de déterminer si ce tableau s’inspire de cette gravure ou si ces deux œuvres procèdent d’un même modèle inconnu.

Certains historiens de l’art ont reconnu dans le personnage à gauche du trône un autoportrait du peintre brugeois, que l’on considère comme un portraitiste de grand talent, mais il pourrait également s’agir de l’autoportrait d’un membre de son atelier, qui serait dans ce cas l’auteur du panneau.